實驗室動物組織研磨方法步驟及注意事項

　　在實驗室中，某些對于動物的研究課題試驗，往往需要先將動物組織進行研磨前處理，而手動研磨不容易達到預(yù)期的研磨效果，不能獲取到合格的檢測樣品。實驗室研磨動物組織，我們可以借助專用的動植物組織研磨儀器，簡便且有效，下面天津東方天凈就來詳細介紹下動物組織研磨方法步驟及注意事項。

TJG動植物組織研磨儀

動物組織研磨前處理步驟

一、實驗前的準(zhǔn)備

1、在實驗操作前，先將PBS緩沖液(磷酸緩沖鹽溶液，phosphate buffer saline)進行4℃預(yù)冷，然后準(zhǔn)備若干冰塊備用。

2、使用75%濃度的乙醇溶液對鑷子、剪刀進行消毒處理，如果還需對動物組織進行RNA提取，還要使用酒精燈對鑷子和剪刀進行再次消毒，以盡可能消除RNA酶。

3、所有實驗耗材都應(yīng)進行高溫高壓滅菌，以保證各種酶不會對后續(xù)實驗產(chǎn)生影響。

4、將2ml離心管置于冰塊上，并加入適量的PBS緩沖液，一般情況下，實驗所需的組織勻漿的質(zhì)量體積比為10%(即0.1g組織樣本加入1ml液體)。

5、將需要進行研磨的組織樣本從零下80℃的冰箱內(nèi)取出，置于冰上，使用滅菌后的鑷子和剪刀，將樣本切成小塊(每塊重量不宜超過0.02g，總重量不宜超過0.2g)，然后放入加好相應(yīng)液體的離心管中，備用。

冰箱

6、取出已經(jīng)滅菌的氧化鋯研磨球，按照每個離心管一顆的數(shù)量，將鋯球放入離心管中。此過程需使用鑷子進行該操作，并且盡量避免液體飛濺而導(dǎo)致樣本污染。

二、組織研磨

1、將放入樣品和鋯球的離心管標(biāo)記好編號，然后放入專用的研磨適配器中，蓋好蓋子，將適配器固定在研磨機上。

裝有樣本的離心管

離心管編號

2、設(shè)置振動頻率為1000次/分鐘，振動時間為5分鐘。

TJS三維振動球磨機

3、由于振動過程中的撞擊和摩擦，會產(chǎn)生大量熱量，使得離心管溫度升高，所以可以選擇具有低溫控制功能的設(shè)備，或者將適配器放入液氮罐進行預(yù)冷凍，并減少研磨時間，避免高溫對樣本的破壞。

三、組織上清的吸取及保存

1、將研磨完成后的離心管放入低溫環(huán)境下的高速離心機內(nèi)，以4000rpm的速度離心30分鐘。

2、將所得的上清液用移液器取出，轉(zhuǎn)入至新的離心管內(nèi)，并于零下80℃的環(huán)境長期保存。

裝有上清液的離心管

動物組織研磨前處理注意事項

1、需要研磨的樣本一定要在冰上操作，保證低溫環(huán)境，這樣可以降低樣本中蛋白質(zhì)(或RNA)的降解速度。

2、所有實驗操作均需佩戴醫(yī)用口罩、手套，并且穿戴好實驗服。

3、在進行離心操作前，需要提前開啟離心機，讓離心機預(yù)冷，保持4℃左右的低溫環(huán)境。

4、研磨使用的氧化鋯研磨球一定不能多放，數(shù)量過多會導(dǎo)致管壁破裂，從而造成樣本丟失或污染。

5、使用移液器吸取上清液時，不要吸取到沉淀。

附：實驗所需儀器、工具及試劑

　　儀器：TJS三維振動球磨機、低溫高速離心機

　　工具：研磨適配器、氧化鋯研磨球、移液器、手術(shù)用剪刀、2ml離心管、鑷子

動物組織研磨適配器

　　試劑：PBS緩沖液、RIPA裂解液、75%濃度乙醇溶液、Trizol試劑

　　關(guān)于實驗室動物組織研磨的方法步驟及相關(guān)注意事項就為大家介紹到這里了，使用東方天凈TJG-215動植物組織研磨儀或TJS三維振動球磨機，搭配研磨適配器，就能將各類動物組織進行快速有效的研磨。